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最佳答案:可以这样来说吧,首先你应该有一条已知的序列,反向引物设计时在序列的5'方向找一段序列然后反向互补作为反向引物,在3'方向直接找一段序列作为正向引物.这样就OK了
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最佳答案:这样还不错.5‘段增加稳定性,3’端最好不要有太多的GC,一般来说,最后5个碱基里不要出现超过2-3个G或者C.因为3‘端是扩增的关键,一旦出现3’端的错配或者
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最佳答案:Tm值本来就是人为定的一个预测值,三个Tm值代表的是不同的计算方法,常用的是第三种2*AT+4GC.看退火温度时,酶切位点和保护碱基一般是不考虑在内的,因为pc
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最佳答案:在real-time PCR中,一般原则是100~150bp的扩增产物最好(Livak et al., Methods 2001),能使扩增效率尽量接近100%
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最佳答案:这是针对逆转录pcr而言,所谓的跨外显子就是一个引物(比如上游引物)、出现在两个外显子交界,那么做RT-PCR时,dna 由于2个外显子被内含子隔开,引物就不会