1.接通电源,打开仪器开关,掀开样品室暗箱盖,预热10分钟.
2.将灵敏度开关调至“1”档（若零点调节器调不到“0”时,需选用较高档.）
3.根据所需波长转动波长选择钮.
4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处,用擦镜纸擦清外壁,放入样品室内,使空白管对准光路.
5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器,使读数盘指针指向T=0处.
6.盖上暗箱盖,调节“100”调节器,使空白管的T=100,指针稳定后逐步拉出样品滑竿,分别读出测定管的光密度值,并记录.
7.比色完毕,关上电源,取出比色皿洗净,样品室用软布或软纸擦净.
原理:（一）郎伯-比尔定律
光是一种电磁波,具有一定的波长和频率.可见光的波长范围在400~760nm,紫外光为200~400nm,红外光为760~500000nm.可见光因波长不同呈现不同颜色,这些波长在一定范围内呈现不同颜色的光称单色光.太阳或钨丝等发出的白光是复合光,是各种单色光的混合光.利用棱镜可将白光分成按波长顺序排列的各种单色光,即红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等,这就是光谱.有色物质溶液可选择性地吸收一部分可见光的能量而呈现不同颜色,而某些无色物质能特征性地选择紫外光或红外光的能量.物质吸收由光源发出的某些波长的光可形成吸收光谱,由于物质的分子结构不同,对光的吸收能力不同,因此每种物质都有特定的吸收光谱,而且在一定条件下其吸收程度与该物质的浓度成正比,分光光度法就是利用物质的这种吸收特征对不同物质进行定性或定量分析的方法.
在比色分析中,有色物质溶液颜色的深度决定于入射光的强度、有色物质溶液的浓度及液层的厚度.当一束单色光照射溶液时,入射光强度愈强,溶液浓度愈大,液层厚度愈厚,溶液对光的吸收愈多,它们之间的关系,符合物质对光吸收的定量定律,即Lambert-Bear 定律.这就是分光光度法用于物质定量分析的理论依据.