大肠杆菌的检测指标和方法
大肠杆菌的检测原理：
大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌,该菌主要来源于人畜粪便,因此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能.食品中的大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示.
2.所需的仪器设备与器具：
2.1 恒温培养箱：36±1℃.
2.2 1000ml三角烧瓶、1ml、10ml移液管.
2.3 接种针.
2.4 显微镜.
2.5 超净工作台.
2.6 玻片、酒精灯、洗耳球、试管架.
2.7 天平：感量0.01g.
2.8 灭菌釜.
2.9 培养皿（直径为90mm）、试管,经121℃、30分钟灭菌.
2.10试管夹、酒精灯、秒表、载玻片 3.培养基及试剂：
3.1 乳糖胆盐发酵管：按照制造厂家使用说明进行配制,灭菌.
3.2 伊红美兰琼脂平板： 按照制造厂家使用说明进行配制,灭菌.
3.3 乳糖发酵管： 按照制造厂家使用说明进行配制,灭菌.
3.4 革兰氏染色液.
3.4.1 结晶紫染色液：
结晶紫 1g
95%乙醇 20ml
1%草酸铵水溶液 80ml
将结晶紫溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合.
3.4.2 革兰氏碘液：
碘 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300ml
将碘与碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至300 ml.
3.4.3 沙黄复染液：
沙黄 0.25g
95%乙醇 10ml
蒸馏水 90ml
将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释.
3.5 生理盐水.
4.检验程序：
检样
↓
稀释
↓
乳糖胆盐发酵管,36±1℃,24±2hr
↓ ↓
不产气 产气
↓ ↓
大肠菌群阴性 伊红美兰琼脂平板,36±1℃,24±2hr
↓
报告 ↓ ↓
革兰氏染色 乳糖发酵管,36±1℃,24±2hr
↓
↓ ↓ ↓ ↓
G+ G-,无芽孢杆菌 产气 不产气
↓ ↓
大肠菌群阴性 大肠菌群阴性
↓ ↓ ↓
报告 大肠菌群阳性 报告
4.测定方法：
4.1 检样稀释：
4.1.1 以无菌操作将检样25ml(或25g)放于含有225ml灭菌生理盐水的灭菌塑料烧杯中,经充分振摇成1：10均匀稀释液.
4.1.2 用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml,注入含有9ml灭菌生理盐水的 试管中,振摇成1：100稀释液.
4.1.3 重复5.1.2的操作,使成1：1000稀释液.
4.2乳糖胆盐发酵试验：根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择二个稀释度,每一稀释度接种3管,接种量在1ml以上者,用双料乳糖胆盐发酵管.1ml及1ml以下者,用单料乳糖胆盐发酵管.然后置于36±1 ℃培
养箱内,培养24±2hr,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌
群阴性；如有产气者,则可按以下程序进行.
4.3分离培养：将产气的发酵管分别接种于伊红美兰琼脂平板上,置36±1℃温箱内,培养24hr后取出,观察菌落形态,并作革兰氏染色.
4.4证实试验：在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色同时接种乳糖发酵管,置于36±1℃温箱内培养24±2hr,观察产气情况.乳糖发酵管产气,革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,即可报告为大肠菌群阳性.
4.5报告：根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100ml(g)大肠菌群的最可能数.