两方面考虑:
1 改善PCR反应条件,从你提供的情况看,55度退火太低.建议做个温度梯度PCR,在55度到67度间,每升高2度,做一个反应.另建议将反应体系设为20微升(温度升降过程易于达到目标值).
2. 如果通过改变退火温度,仍然达不到想要效果,考虑模板是否合适;此外,建议对引物重新设计,适当增长引物长度,改变引物位置.
考虑到了上述因素,一般来说,没道理做不出一条带的.
两方面考虑:
1 改善PCR反应条件,从你提供的情况看,55度退火太低.建议做个温度梯度PCR,在55度到67度间,每升高2度,做一个反应.另建议将反应体系设为20微升(温度升降过程易于达到目标值).
2. 如果通过改变退火温度,仍然达不到想要效果,考虑模板是否合适;此外,建议对引物重新设计,适当增长引物长度,改变引物位置.
考虑到了上述因素,一般来说,没道理做不出一条带的.