谈谈个人见
1,选对插入序列,克隆构建好后,测序,看你插入到原核载体中的序列是否正确、完整,有无移码和各种突变,起始密码子和终止密码是否正确；
2,所选的表达体系是否合适,有时,你需要表达的基因可能来源于真核生物的线粒体或叶绿体,其中是否有稀有密码子,否则会影响表达效率,表达的蛋白是可溶的还是包涵体,是否需要分泌型表达；
3,原核表达的蛋白是没有糖基化修饰的,如果你的目的蛋白本身有糖基化,而且是后续研究必须的,就不适合用原核表达；
4,既然是原核表达,大多是要纯化的,就要考虑你的纯化方案,以及选择合适的标签和标签的添加位置；
纯属个人见解,欢迎大家继续讨论和补充,祝愉快!