(1)100kD蛋白的纯化可以分为两步:离子交换和分子筛.因为48kD和75kD的蛋白等电点与目的蛋白相差很大,所以在相同的buffer条件下,前两者带点性质与目的蛋白相差很大,通过离子交换的方法可以将三者分开.具体来说可以选用pH5.5左右的buffer,用Q柱纯化.54kD的蛋白和100kD的蛋白电荷性质类似,通过离子交换层析可能分不开,但二者分子量有近两倍的差距,适用于分子筛,所以第二步选用合适的分子筛利用二者分子量的大小分开即可.(2)6M盐酸胍处理之后除了肽键和二硫键无法打开之外,蛋白完全变性.这种条件下测得的分子量是25kD,加入beta-ME之后二硫键被还原打开,测得分子量为10kD和15kD,说明这二者是通过二硫键相连的,所以结构为一个10kD和一个15kD的亚基通过分子间二硫键的作用连成二聚体.也有可能是异源四聚体,异源六聚体,异源八聚体等等.因为第一步测定的分子量是在盐酸胍条件下,多聚体之间如果没有二硫键连接也会被解聚.如下图:
有四种蛋白质溶液,其大小和等电点分别是54kD和4,48kD和7,100kD和4,75kD和10 ,请设计实验
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