要分离77KD和80KD的两个蛋白,要用多大浓度的SDS-PAGE胶能有较好的分辨率?

3个回答

  • 一般凝胶浓度低是容易出现条带模糊的情况.个人手法是:用好点的材料制备凝胶来进行分析.10%的浓度可以用来分离这两种蛋白,将电泳电压在后半程调高可改善条带清晰度.也可以调高分离胶浓度至12%,但差别会较10%的更小.是在不行可以考虑用梯度胶分.

    “用好点的材料”是说的丙烯酰胺和甲叉.

    “将电泳电压在后半程调高改善条带扩散”,我分离胶用135V,缩短电泳时间.

    两种浓度的差别也不是太大.为了扩大差别,可以通过预染marker来控制电泳时间,将小分子的蛋白跑出去,用更多的凝胶长度来加大两者的差别.不过电泳时间延长对条带清晰程度会有影响.

    样品的pH也会对条带的清晰程度有影响,以前做分子量和你的差不多大的酵母样时,条带就有些模糊.其实有时只要能将两者区分开,不一定非要追求最佳分离效果.

    个人观点,仅供参考!