解题思路：在构建基因表达载体的过程中，需要用同种限制酶切割，然后再用DNA连接酶连接形成重组质粒．目的基因导入细菌等受体细胞时，常用Ca2+处理细菌使细菌处于感受态状态．
A、在构建基因表达载体的过程中，需要用同种限制酶切割，目的是形成相同的黏性末端，便于目的基因和质粒的连接，故A正确；
B、常用Ca2+处理大肠杆菌使大肠杆菌处于感受态，易于目的基因的导入，故B错误；
C、载体中的标记基因就是用来检测目的基因是否导入受体细胞的，故C正确；
D、即使目的基因导入受体细胞，也不一定能复制、转录、翻译（表达），所以基因工程的最后步骤才是目的基因的检测与鉴定，故D正确．
故选：B．
点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．
考点点评： 本题较简单，要求考生识记基因工程中的工具，了解基因工程的操作步骤，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力．