解题思路：检测土壤中细菌总数，可以看出采用的计数方法是稀释涂布平板法进行计数．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，选择菌落数在30～300的进行记数，求起平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数．
用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的进行记数，求起平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数．
故选：D．
点评：
本题考点： 测定某种微生物的数量．
考点点评： 本题考查了检测土壤中细菌数量的检测方法，属于识记内容，理解、识记稀释涂布平板法的过程，就可以做出正确的答案．