解题思路：蛋白质的提取与分离的原理是根据蛋白质的理化性质，即：蛋白质的形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等的千差万别，由此提取和分离各种蛋白质．胶色谱法的原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢．蛋白质的提取与分离的步骤为：（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放．（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析．（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质．（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳．
A、在凝胶色谱柱内，分子量较大的蛋白质移动的路程较短，移动速度较快，A错误；
B、分子量小的蛋白质穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢，从凝胶色谱柱中最后分离出来，B正确；
C、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法常用来进行鉴定蛋白质的纯度，C正确；
D、分离血红蛋白溶液时，从上往下依次是有机溶剂、脂类物质、血红蛋白、红细胞破碎物沉淀，需要的是离心管中的从上往下数第三层溶液，D正确．
故选：A．
点评：
本题考点： 蛋白质的提取和分离
考点点评： 本题主要考查蛋白质的提取与分离的原理即操作流程，意在强化学生对相关实验的原理及流程的识记、理解与运用．