Question

一个基因操作方面的问题在HeLa细胞中发现一种新蛋白A（蛋白序列已知）存在.设计实验,制备A蛋白的多克隆抗体并对其亚细胞

Answer 1

通过blastP对该新蛋白序列进行同源性比对,确定保守区；反推确定核酸位置并通过blastN进行同源性比对,确定保守区；提HeLa细胞总RNA后反转录,针对保守区设计引物以反转录后得到的cDNA为模板进行PCR,产物克隆测序后使用primer进行翻译得氨基酸序列,与新蛋白A进行比对,确定所得PCR产物编码新蛋白A；使用所得PCR产物构建表达载体并转化相应宿主菌,纯化得到相应蛋白（全蛋白A或部分蛋白）；用纯化得到相应蛋白（全蛋白A或部分蛋白）免疫动物后得血清,该血清含A蛋白的多克隆抗体；用含A蛋白的多克隆抗体与HeLa细胞孵育后加入荧光二抗（抗被免疫动物的抗体）,荧光素分子标记亚细胞结构后上荧光显微镜观察.