解题思路：细胞分裂间期，细胞中主要进行DNA的复制和有关蛋白质的合成，此时DNA分子结构不稳定，容易发生基因突变．
①秋水仙素的作用是抑制有丝分裂前期纺锤体的形成，①错误；
②诱变育种的原理是基因突变，一般发生在细胞分裂间期，②正确；
③花粉是减数分裂后形成的配子，因此花粉离体培养不会发生在间期，③错误；
④化疗的原理是用化学药物抑制有丝分裂间期DNA的复制，④正确．
故选：D．
点评：
本题考点： 细胞有丝分裂不同时期的特点；恶性肿瘤的防治；诱变育种．
考点点评： 本题考查有丝分裂、诱变育种、染色体变异和恶性肿瘤的防治，要求考生识记秋水仙素的作用原理、基因突变发生的时期及化疗的原理，能对各选项作出准确的判断，属于考纲识记和理解层次的考查．