Question

实验设计：用大肠杆菌表达来源于动物细胞的某一氧化还原酶；

Answer 1

1.先克隆该酶的cDNA全长,插入可在大肠杆菌内表达的载体进行表达.克隆的时候可以在末端加入标记,比如6-HIS等,以便于表达后的纯化

2.在大肠杆菌中表达

3.裂解细菌,利用亲和柱纯化蛋白.

4.用纯化后的蛋白免疫小鼠（或者兔子）,制备抗体

5.筛选抗体

6.培养表达该酶的动物细胞于玻片.固定,加制得的抗体孵育,洗片,再加荧光标记的二抗孵育（具体的孵育过程我就不详细写了）.用共聚焦荧光显微镜观察,就可以在细胞内定位了.