解题思路:基因工程技术的基本步骤:
(1)目的基因的获取:方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成.
(2)基因表达载体的构建:是基因工程的核心步骤,基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等.
(3)将目的基因导入受体细胞:根据受体细胞不同,导入的方法也不一样.将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法;将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法;将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法.
(4)目的基因的检测与鉴定:分子水平上的检测:①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术;②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术;③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术.个体水平上的鉴定:抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等.
(1)为了便于将含目的基因的细胞筛选出来,所选择的重组质粒上应该具有标记基因.构成重组质粒M时,通常要用(同种)限制性核酸内切酶分别切割含目的基因的DNA片段和质粒,再用DNA连接酶将目的基因和质粒连接形成重组质粒.
(2)将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法;由于受精卵的全能性最高,因此培育转基因动物时,应以受精卵作为受体细胞.
(3)将目的基因导入植物细胞最常用的方法是农杆菌转化法;将转基因植物细胞培育成转基因植株还需要采用植物组织培养技术.
(4)将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法,即用Ca2+(或CaCl2)处理大肠杆菌,使之成为感受态细胞,利于完成转化过程.
故答案为:
(1)标记基因 (同种)限制性核酸内切酶 含目的基因的DNA片段 质粒
(2)显微注射 受精卵
(3)农杆菌转化法 植物组织培养
(4)Ca2+(或CaCl2) 感受态
点评:
本题考点: 基因工程的原理及技术.
考点点评: 本题结合图解,考查基因工程的相关知识,要求考生识记基因工程的操作工具及具体的操作步骤,掌握各步骤中的相关细节,能结合图中信息准确答题,属于考纲识记和理解层次的考查.