解题思路：阅读题干，明确知识点，本题是描述课本中实验的操作和判断，梳理相关的基础知识，采用逐项分析和排除的方法综合作答．
A、脂肪鉴定实验中，用染色剂染色后，需要质量分数为50%的酒精洗去浮色，A错误；
B、研磨时没有加入CaCO3，叶绿素被破坏，B错误；
C、在纸层析法分离叶绿体中色素的结果中，蓝绿色带最宽，说明叶绿素含量最多，C错误；
D、呼吸作用不需要光，所以测定动物的呼吸作用时，在光下或暗处进行对实验不影响，D正确．
故选：D．
点评：
本题考点： 检测脂肪的实验；叶绿体色素的提取和分离实验；细胞呼吸的过程和意义．
考点点评： 本题考查实验操作过程，综合考查了脂肪鉴定、叶绿体中色素的提取和分离，以及呼吸作用测定等内容．