等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点时应注意哪些

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  • 1.上样前冲去上样空底部未聚合的丙稀酰胺,否则电泳过程中会发生聚合;

    2.现在有商品化的等电聚焦凝胶,但只限于水平平板电泳系统(如Pharmmacia-LKB,Hoefer).

    3.加入过硫酸胺和TEMED,轻轻混匀(开始聚合,操作要迅速);

    4.将上述混匀溶液倒如灌胶器(尽量避免气泡产生);

    5.插入梳子,将梳子侵入胶内(不要产生气泡);

    6.聚合约1小时;

    7.聚合完成,小心拔去梳子;

    8.将凝胶同冷却装置连接后插入电泳池,蛋白样品上样前最好用阳极电极液注入上槽中确定是否有渗漏.