Question

刚刚学做克隆,看到网上有两种平末端DNA加A尾方法,一种是切胶回收后加,另一种是直接加在PCR产物中,想请问：

Answer 1

1 一般不需要,你可以比对你用的高保真酶的buffer和Taq酶的buffer,要加也只能加差异的部分,如果直接加buffer里面离子浓度肯定都不对了；

2 都可以,不过我觉得还是应该在充分延伸后暂停或重新换程序；

3 TA克隆成功说明加A成功；如果要做阳性对照就用Taq酶直接PCR一管；

4 一定要纯化,不然里面全是A,你得到的就大部分是假阳性!