解题思路：质壁分离的原因外因：外界溶液浓度＞细胞液浓；内因：原生质层相当于一层半透膜，细胞壁的伸缩性小于原生质层；表现：液泡由大变小，细胞液颜色由浅变深，原生质层与细胞壁分离．
分离色素原理：各色素随层析液在滤纸上扩散速度不同，从而分离色素．溶解度大，扩散速度快；溶解度小，扩散速度慢．滤纸条从上到下依次是：胡萝卜素（最窄）、叶黄素、叶绿素a（最宽）、叶绿素b（第2宽），色素带的宽窄与色素含量相关．
A、将植物细胞置于某一浓度的蔗糖溶液中，若细胞不能发生质壁分离，原因可能是该细胞是死细胞或者该蔗糖溶液浓度低于细胞液浓度，故A错误；
B、洋葱鳞片叶表皮细胞中无叶绿体，另外细胞膜在光学显微镜下很难看到，故B错误；
C、纸层析法分离色素时，扩散最快的是在层析液中溶解度最大的胡萝卜素，叶绿素a含量最多，故C错误；
D、探究pH对酶活性的影响时，要设置对照试验，自变量只有PH，其它条件都相同，故D正确．
故选：ABC．
点评：
本题考点： 细胞质壁分离与质壁分离复原现象及其原因；探究影响酶活性的因素；叶绿体色素的提取和分离实验．
考点点评： 本题考查植物细胞的质壁分离和复原、提取和分离叶绿体中色素、探究pH对酶活性的影响等相关知识，意在考查学生识记和理解所学实验，属于中档题，注意A选项中有大液泡（成熟）的活的植物细胞，才能发生质壁分离．