如何处理Real time PCR的数据结果

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..不同的处理方法得到不同的结果...做的是相对定量,SYBR Green,选用2^（-△ △ Ct）法一般大家是怎么处理的呢?比方实验设置如下：内参基因：对照组1、对照组2、对照组3 实验组1、实验组2、实验组3 目的基因：对照组1、对照组2、对照组3 实验组1、实验组2、实验组3 数据处理的时候,是先分别取内参、目的基因的三次平行实验的均值再拿相应均值相减得到 △ Ct,还是先算每组△ Ct(目的基因-内参基因）后再取平均?还有对于内参基因的数据,如果所得Ct 值差值在1 以内,是否可以将所有的内参取平均,然后△ Ct 值就拿每个组的目的基因减去这个内参均值?对于内参的CT 值怎样的数据算比较好呢?一般组间、组内CT 差值在多少比较合理?另外对于这个REAL-TIME PCR 的结果除了用EXCEL 处理之外有没有其他比较可信方便的专业处理软件呢?内参基因：18s for control,18s for treatment sample 目的基因：control sample,treatment sample 复孔取平均值 △ Ct for control sample = Ct of comtrol sample - Ct 18s for control △ Ct for treatment sample = Ct of treatment sample - Ct 18s for treatment sample △△ Ct = △ Ct for treatment sample - △ Ct for control sample 2^(-△ △ Ct) 2^(-△ △ Ct) =1 means miRNA expression no change 2^(-△ △ Ct) 1 means expression increase after treatment 见下图.说得很详细.