操作步骤
1．涂片将培养14—16小时的枯草芽孢杆菌和培养24小时的大肠杆菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚）,干燥、固定.固定时通过火焰1—2次即可,不可过热,以载玻片不烫手为宜.
2．染色
（1）初染 加草酸铵结晶紫一滴,约一分钟,水洗.
（2）媒染 滴加碘液冲去残水,并覆盖约一分钟,水洗.
（3）脱色 将载玻片上面的水甩净,并衬以白背景,用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止,约20—30秒钟,立即用水冲净酒精.
（4）复染 用番红液染1—2分钟,水洗.
（5）镜检 干燥后,置油镜观察.革兰氏阴性菌呈红色,革兰氏阳性菌呈紫色.以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准,过于密集的细菌,常常呈假阳性.
（6）同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片,作革兰氏染色对比.
革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度,如脱色过度,则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时,阴性菌可被误染为阳性菌.此外,菌龄也影响染色结果,如阳性菌培养时间过长,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈阴性反应.