淋巴细胞分离液分离脾脏淋巴细胞
然后用FITC -CD4 和 PE-CD25抗体标记上流式检验可是看不见CD25阳性那一定是技术问题,你先调整一下机器的电压和补偿,Treg的CD25表达峰度不是非常高,如果补偿有问题很可能会假阴性.其次你再摸索一下抗体标记的浓度,找个高手可能容易些.
Treg标记一般比较认可的是CD4和foxp3的标记,本人做过不少Treg监测,CD4、foxp3阳性在脾脏CD4+细胞的比例和CD4 CD25阳性的比例差不多,也就是说,在正常小鼠或者处于免疫抑制状态下的小鼠,CD4CD25+细胞就是CD4foxp3阳性Treg,若是处于免疫活化状态小鼠,CD25+细胞就可能实T effector 细胞Treg细胞在小鼠CD4+ T细胞中的比例是5－10％,总T 1－2％,关于检测问题,你可以用BioLegend公司的CD4/CD25/Foxp3检测试剂盒,效果不错的.