Tween-20有复性抗原的作用,可提高特异性的识别能力.在做westen blot时,用惰性蛋白质或非离子去污剂封闭膜上的未结合位点可以降低抗体的非特异性结合.封闭剂应该封闭所有未结合位点而不替换膜上的靶蛋白、不结合靶蛋白的标委、也不与抗体或检测试剂有交叉反应.最常见的封闭剂是BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶和Tween-20（0.05 - 0.1%）稀溶液.
一抗的稀释看你试验的要求了.二抗你说的是酶标抗体吧,这个要稀释到工作浓度,后面的显色效果才是最佳的!
BSA主要是封闭液中用到,其实作用显而易见是起到封闭效果,就是结合包被过程中未结合的结合位点,提高ELISA中的特异性结合,提高实验的精确度.一般浓度是1%-2%