1）Vemurafenib (PLX4032, RG7204)是一种新型有效的 B-RafV600E 抑制剂,IC50为31 nM. 2）激酶实验: RAF激酶活性测定 通过测量生物素化的BAD蛋白磷酸化而测定野生型RAF和突变型的激酶活性.在20 mM Hepes (pH 7.0), 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0.01% (v/v) Tween-20, 50 nM 生物素-BAD 蛋白,和 1 mM ATP 的混合物中室温下进行反应.加入5 μL 含20 mM Hepes (pH 7.0), 200 mM NaCl, 80 mM EDTA, 0.3% (w/v) 牛血清蛋白 (BSA)的溶液,5分钟后,反应终止.终止溶液也包含p-BAD (Ser112) 抗体,链霉亲和素包被的供体小珠,蛋白A 受体小珠.抗体和小珠在终止溶液中黑暗环境下室温预温育30分钟. 最终抗体被稀释2000倍,每个小珠的终浓度为10 μg/mL.重复做三次单独纯化蛋白实验,去不同两批的平均值作为突变活性. 补充： 更多资料： http://www.***.cn/products/PLX-4032.html
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