不显色的问题我也遇到过,一般重新配制试剂就可以解决,因为反应中的某个试剂不对或失效就会导致不显色.你说的酸度估计是指反应在偏酸性条件下进行吧.反应中有氢离子参与.
1、 抗坏血酸（HG3-536）：20g/L；
称取10g抗坏血酸,精确至0.5g,称取0.2g乙二胺四乙酸二钠,精确至0.01g,溶于200mL水中,加入8.0mL甲酸,用水稀释至500mL,混匀,贮存于棕色瓶中（有效期一个月）.
2、钼酸铵（GB 657）：26g/L溶液；
称取13g钼酸铵,精确至0.5g,称取0.5g酒石酸锑钾,精确至0.01g,溶于200mL水中,加入230mL硫酸溶液（2.2）,混匀,冷却后用水稀释至500mL,混匀,贮存于棕色瓶中（有效期二个月）.
3、磷标准溶液：1mL含有0.5g PO43－；
称取0.7165g预先在100～105℃干燥并以恒重过的磷酸二氢钾（2.1）精确至0.0002g,溶于约500mL水中,定量转移至1L容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀.
4、磷标准溶液：1mL含有0.02mg PO43－；
取20.00mL磷标准溶液（2.6）于500mL容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀.
5、过硫酸钾（GB641）,40g/L溶液；
称取20g过硫酸钾,精确至0.5g,溶于500mL水中,摇匀,贮存于棕色瓶中（有效期一个月）.
原理：在酸性溶液中,用过硫酸钾作分解剂,将聚磷酸盐和有机磷转化为正磷酸盐,正磷酸盐与钼酸铵反应生成黄色的磷钼杂多酸,再用抗坏血酸还原成磷钼蓝,于710nm最大吸收波长处分光光度法测定.
标准曲线：分别取0（空白）、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00磷标准溶液（2.7）于9个50mL容量瓶中,依次向各瓶中加入约25mL水,2.0mL钼酸铵溶液（2.5）,3.0mL抗坏血酸溶液（2.4）,用水稀释至刻度,摇匀,室温下放置10min.在分光光度计710nm处,用1cm吸收池,以空白调零测吸光度.以测得的吸光度为纵坐标,相对应的PO43－量（mg）为横坐标绘制工作曲线.
从试样中取5.00mL试验溶液于100mL锥形瓶中,加入1.0mL硫酸溶液（2.3）,5.0mL过硫酸钾溶液（2.8）,用水调整锥形瓶中溶液体积至约50mL,置于可调电炉上缓缓煮沸15min至溶液快蒸干为止,取出后流水冷却至室温,定量转移至50mL比色管中.加入2.0mL钼酸铵溶液（2.5）,3.0mL抗坏血酸溶液（2.4）,用水稀释至刻度,摇匀,室温下放置10min.在分光光度计710nm处,用1cm吸收池,以不加试验溶液的空白调零测吸光度.