比较了四个变体的cDNA序列,它们只在外显子3和外显子7之间存在区别,因此可以通过设计针对这两个外显子的特殊引物来区别这四个变体.
1.总RNA提取
2.逆转录PCR
外显子3引物：熔解温度：约52℃
正向引物 5' GATTGGACAGGCTGGACT 3'
反向引物 5' AGAAGTGGTGGCAGTGATT 3'
预测结果:Nurr1-a,b,c产物大小288bp;Nurr1-d无产物
7号外显子引物:Tm:58-59°C
sense primer:5' CCAAAGCCGACCAAGACC 3'
anti-sense primer:5' ATTATTGCTGGCGGTGGC 3'
预测结果:Nurr1-a,d 472bp长的产物; Nurr1-b有418bp产物; Nurr1-c有351bp产物.
3.结果分析:
Nurr1-a Nurr1-b Nurr1-c Nurr1-d
扩增3号外显子 288bp 288bp 288bp 无产物
a扩增7号外显子 472bp 418bp 351bp 472bp
4.问题:Nurr1-b,c,d的RefSeq记录因为支持不足而被长期废止