可以用最基本的方法检测食品中的大肠菌群,就是先用乳糖胆盐发酵,样品接种量在1ml以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1ml及1ml以下者,用单料乳糖胆盐发酵管.每一稀释度接种3管,置37℃恒温箱内培养24h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告大肠菌群阴性,如有产气者,则将产气的发酵管分别划线接种在伊红美蓝琼脂平板上,置37℃恒温箱内,培养24h,取出观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实实验,证实实验是挑取可疑菌落1到2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置37℃培养24h,凡产气,革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,即可报告为大肠菌群阳性.根据证实实验为大肠菌群阳性的管数,查MPN表,报告每100ml(g)大肠菌群最可能数.
乳糖胆盐发酵管成分:
蛋白胨20g,乳糖10g,牛胆盐(猪、羊)5g(0.04%),溴甲酚紫水溶液25ml,蒸馏水1000ml,pH7.4.制法:将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中.校正pH值,加入指示剂,分装10ml,并放入一个小倒管,灭菌115℃15min.
注:双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍.
乳糖发酵管:成分:蛋白胨20g,乳糖10g,0.04%溴甲酚紫水溶液25ml,蒸馏水1000ml,pH7.4.制法:将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,按检验要求分装30ml、10ml或3ml,并放入小倒管,高压灭菌115℃15min.
注:30ml和10ml乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3ml乳糖管供大肠菌群证实试验用.
伊红美蓝琼脂(EMB)成分:蛋白胨10g,乳糖10g,磷酸氢二钾2g,0.65%美蓝溶液10ml,2%伊红水溶液20ml,琼脂17g,蒸馏水1000ml,pH7.6.制法:将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶于水中,校正pH,分装烧瓶内,灭菌121℃15min备用,临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷至50-55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板.