Question

请问,谁能提供一下PET-28质粒的启动子序列,我要用来做引物的.

Answer 1

自行设计一对引物,从质粒pUC18上扩增一段无启动子和信号肽的β-内酰胺酶基因(△P△SPAmp),经pGEM-T-EASY载体克隆到pET- 28衍生质粒pKan的EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ间,得到在Kan平板中生长而在Amp和Kan双抗平板中不能生长的转化子pMBL-E质粒．经部分酶切补平自连,筛选得到消除Hind Ⅲ位点端EcoR Ⅰ位点的质粒,即为用于输出信号基因片段捕获的目的载体pMBL,大小为3．46kb．经酶切鉴定和测序分析,表明构建的载体与预期设计的一致,并应用四环素抗性基因(Tet‘)对载体的有效性进行了验证,证明构建的载体pMBL能有效捕获含启动子和信号肽序列的输出蛋白编码基因．