解题思路:分析题图:图示表示应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系的过程,其中①表示以mRNA为模板逆转录形成DNA;②表示采用PCR技术扩增目的基因;③表示用限制酶切割运载体;④表示基因表达载体的构建过程;⑤表示将目的基因导入大肠杆菌,使其大量繁殖;⑥⑦表示采用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞.
(1)切割运载体时采用的是限制酶EcoRⅠ、SmaⅠ,为了便于目的基因与运载体定向连接形成重组DNA,还应在基因两侧的A和B位置接上限制酶EcoRⅠ、SmaⅠ的识别序列.
(2)PCR技术利用的是DNA复制的原理,DNA复制具有半保留复制的特点.根据题意可知,若共用了引物Ⅱ31个,说明产生了32个子代DNA分子,由此可见目的基因扩增了5代.
(3)由于质粒是小型环状DNA,若用EcoRⅠ和PstⅠ两种限制酶同时切割载体质粒,则能形成2种不同长度的DNA片段,共有4个游离的磷酸基团.
(4)图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌,而是先将其导入大肠杆菌,目的是获取大量重组质粒(让目的基因扩增).
(5)将目的导入微生物细胞时,需要用Ca2+处理微生物细胞,使其成为易于吸收周围环境中DNA的感受态.因此步骤⑤⑥过程中都需用Ca2+处理两类细菌.从分子水平检测目的基因是否表达,采用抗原-抗体杂交法.
故答案为:
(1)EcoRⅠ、SmaⅠ
(2)5
(3)2 4
(4)获取大量重组质粒(让目的基因扩增)
(5)Ca2+抗原-抗体杂交
点评:
本题考点: 基因工程的原理及技术.
考点点评: 本题结合耐盐碱水稻新品系的培育过程图解,考查基因工程的相关知识,要求考生识记基因工程的原理及操作步骤,能准确判断图中各过程的含义,再结合图中信息准确答题.