解题思路：细菌、真菌的培养步骤：配制培养基→高温灭菌→冷却后接种→恒温培养．
细菌和真菌的生活需要一定的条件，如水分、适宜的温度、还有有机物．因此首先要配制含有营养物质的培养基，可以用牛肉汁加琼脂熬制；然后把培养基和所有用具进行高温灭菌，以防杂菌对实验的干扰；为防止高温杀死细菌、真菌，要等冷却后，在进行接种；接种后放在温暖的地方进行恒温培养．注意：定期观察并详细记录实验现象．所以培养细菌和真菌的一般方法正确顺序是②制培养基、①高温灭菌、⑤冷却、③接种、④在温暖处培养培．
故选：D．
点评：
本题考点： 菌落及细菌菌落与真菌菌落的区别．
考点点评： 解答此类题目的关键是熟记细菌、真菌的培养方法