有可能,一步法的试剂里面,可能污染了,不小心引入了RNase,或者试剂失效.
你可以使用cDNA为模板,用一步法的试剂,上机试试,看看会不会有效果.如果还是没有效果,就说明试剂有问题了,那个试剂不要反复冻融.