解题思路：渗透装置中长颈漏斗内液面不再升高时，漏斗内溶液浓度仍大于烧杯内溶液浓度，探究唾液淀粉酶最适温度的实验中，不能用斐林试剂检验还原糖的生成，因用斐林试剂检验时需加热，会影响实验结果，验证光合作用需要光照的实验中，有光和无光为自变量，不是无关变量．
A、渗透装置中长颈漏斗内液面不再升高时，漏斗内溶液浓度仍大于烧杯内溶液浓度，A错误；
B、健那绿是专一性染线粒体的活性染色剂，在显微镜下观察到线粒体呈蓝绿色，B正确；
C、探究唾液淀粉酶最适温度的实验中，不能用斐林试剂检验还原糖的生成，因用斐林试剂检验时需加热，会影响实验结果，C错误；
D、验证光合作用需要光照的实验中，有光和无光为自变量，不是无关变量，D错误．
故选：B．
点评：
本题考点： 观察线粒体和叶绿体；物质进出细胞的方式的综合；酶的特性；光反应、暗反应过程的能量变化和物质变化．
考点点评： 本题综合考查了生物学的基础实验和操作，意在考查学生的应用和理解能力，试题难度一般．