将蛋白提取物分别称六等份置于50 ml离心管中,加入适量的去离子水;然后,分别将3种蛋白提取物的溶解液pH值调至2、4、6、8、9、10,置于常温摇床中振荡60 min,离心(10 000 rpm,10 min),利用考马斯亮蓝法测上清液中蛋白浓度,分析所提蛋白在不同pH值条件下的溶解性.
确定蛋白的等电点在pH值=4左右.首先,将蛋白提取液分别取七等份(每份5 ml)置于50 ml离心管中,并各加入5 ml去离子水,摇匀;然后,分别将蛋白提取液的pH值调至4.6、4.4、4.2、4、3.8、3.6、3.4,调pH值后置于4 ℃冰箱,静置18 h,离心(10 000rpm,10 min),利用考马斯亮蓝法测上清液中蛋白浓度,计算提取方法所提蛋白在不同pH值条件下的沉淀率,根据沉淀率确定蛋白的等电点.蛋白沉淀率的计算公式:沉淀率=(原提取液中蛋白含量-沉淀后上清液中蛋白含量)/原提取液中蛋白含量*100%