这个参数其实是选定物种,你可以尝试在第一次设计的时候,只添加你做的果树的物种的拉丁名去检索.
获得理想的序列以后,用病毒的基因组去blast,确认你的引物序列在里面没有,或很少有同源序列就好了.
如果确认你的样品中有这个序列,引物用primer设计过没有问题,最好能够查看一下：
1.样品制备的问题,是否能够再次纯化模板DNA,或者是稀释模板,减少样品中的干扰成分
2.选择热启动DNA聚合酶,减少非特异扩增（或者选择商品化的Mix,Mix都经过优化的,扩增能力比普通Taq酶,或者是高保真酶要强）
3.用梯度PCR的方式,摸索最佳的退火温度,减少非特异扩增
4.如果确实有其他外源DNA的污染,最好把水,引物,酶全部都换新的再试,因为一旦出现污染,哪怕只是一点点,也会对结果有很大干扰的.