这种情况怎么判断酶切成功?最近我试验遇到了一个问题,我需要提出一个22kb左右的大质粒,进行BamHI大量酶切,但是昨天

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  • 对于大的质粒,用电泳速度去判断基本很难,除非去做脉冲电泳.你看看MARKER的条带和速度就知道了,在100、200时,电泳一会儿就分得很开,而8K、10K想分开就要,要的时间比较长,而象DL15000,后面的条带是10K和15K,就算这样还只能会开一点点.

    并且核酸电泳速度还与本身浓度,盐离子浓度有关,所以大片段普通电泳基本没法判断大小.如果你有λDNA,可以一起跑着试一下,那个更大,但电泳速度与你的23K也不会差太多.

    如果只是单纯的判断是否酶切开了,可以做一下转化.

    用切过的和没切过的一起去转化感受态.看看他们长出多少斑来.理论上,如果酶切完全,不应该长出斑来的.