1确认连接体系没有问题.2 确认设计引物的时候两边酶切位点的碱基和保护碱基没有问题.3 考虑PCR产物回收产物浓度提高一点.连T一般很容易的,我也做的单酶切连接,祝成功啦.
单酶切连接的问题?我是用XbaI单酶切PMD-19载体,将我的两端都是XbaI酶切位点的pcr产物连接上去,但是做了很久
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