1,目的基因的获取:通过各种手段(基因文库,化学合成,PCR技术等)获取胰岛素基因
2,基因表达载体的构建:一般采用质粒,用同一种限制酶切割质粒和切取目的基因(胰岛素基因)使产生相同的粘性末端,将切取的胰岛素基因片段插到质粒的切口处,再用DNA连接酶使质粒和胰岛素基因结合成重组质粒
3,将重组质粒导入受体细胞(如大肠杆菌,用感受态细胞法即Ca+处理)
4,检测与鉴定
1,目的基因的获取:通过各种手段(基因文库,化学合成,PCR技术等)获取胰岛素基因
2,基因表达载体的构建:一般采用质粒,用同一种限制酶切割质粒和切取目的基因(胰岛素基因)使产生相同的粘性末端,将切取的胰岛素基因片段插到质粒的切口处,再用DNA连接酶使质粒和胰岛素基因结合成重组质粒
3,将重组质粒导入受体细胞(如大肠杆菌,用感受态细胞法即Ca+处理)
4,检测与鉴定