首先构建突变载体的方法主要是采用高GC多位点定点PCR扩增发,引起扩增时载体序列重叠,从而获得和构建突变载体.当然,突变载体要和目标低表达基因有同源性或相近性,在复制和表达时,可以实现替代.
然后将突变载体导入宿主细胞中进行突变载体与宿主细胞基因之间进行同源重组,或进行变性复制等,可以将目的基因进行定点敲除,进而实现细胞内基因的低表达.
如何通过构建突变载体的方法使细胞内基因低表达
首先构建突变载体的方法主要是采用高GC多位点定点PCR扩增发,引起扩增时载体序列重叠,从而获得和构建突变载体.当然,突变载体要和目标低表达基因有同源性或相近性,在复制和表达时,可以实现替代.
然后将突变载体导入宿主细胞中进行突变载体与宿主细胞基因之间进行同源重组,或进行变性复制等,可以将目的基因进行定点敲除,进而实现细胞内基因的低表达.