(2011•普陀区模拟)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点.如图是转基因抗病香蕉的培育过程,含目的基因的DNA和

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  • 解题思路:据图分析,该质粒中只有1个标记基因,所以用SmaⅠ酶切割会破坏该标记基因及目的基因;使用EcoRⅠ进行酶切,则含目的基因的外源DNA片段和质粒在DNA连接酶的作用下,会发生自身的环化;因此选用 BamhHI和HindⅢ酶对外源DNA和质粒进行切割.

    图中①是构建基因表达载体;②③是利用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞;④和⑤表示植物组织培养,原理是香蕉组织细胞具有全能性,其中④表示脱分化,⑤表示再分化.

    (1)质粒抗生素抗性基因为标记基因,由图可知,标记基因和外源DNA目的基因中均含有SmaI酶切位点,都可以被SmaI酶破环,故不能使用该酶剪切质粒和含有目的基因的DNA.

    (2)标记基因和外源DNA目的基因中均含有EcoRⅠ酶切位点,在DNA连接酶的作用下,可形成3种环状产物,即外源DNA自身连接、质粒自身连接、外源DNA和质粒连接;构建含目的基因的重组质粒A时,选用 BamhHI和HindⅢ酶对外源DNA和质粒进行切割,这样使目的基因两端的黏性末端不同,可以防止含目的基因的外源DNA片段自身环化,同理,也可以防止质粒自身环化.

    (3)质粒作为运载体的条件:有多个酶切位点、有标记基因、能在宿主细胞内复制并稳定保存,因此在构建重组质粒时,应注意到不能影响质粒的自我复制.

    (4)图中④和⑤表示植物组织培养,原理是香蕉组织细胞具有全能性,其中④表示脱分化,⑤表示再分化.

    (5)培养皿中的培养基除添加营养物质外,还需要添加生长素和细胞分裂素.

    (6)可以从个体水平鉴定图示过程最终是否取得成功,其鉴定方法为:用虫子感染转基因香蕉,观察是否抗虫.

    故答案为:

    (1)如果使用使用SmaI酶切割,将会破坏质粒的抗性基因(标记基因),同时也会破坏目的基因片段.

    (2)3BamH I 和HindⅢ

    (3)复制

    (4)全能脱(去)分化再(促)分化

    (5)生长素、细胞分裂素(顺序可以颠倒)

    (6)检测抗病虫基因在转基因香蕉植株上是否成功表达(用虫子感染转基因香蕉,观察其是否抗虫)

    点评:

    本题考点: 基因工程的原理及技术.

    考点点评: 本题以抗病香蕉味素材,考查基因工程和植物组织培养的相关知识,意在考查考生的理解能力、识记能力和应用能力.