用T4连接酶做载体连接为什么一直连不上

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连不上的因素比较多,首先你要先确保载体和基因片段已经用相同的内切酶处理好,然后再看连接体系中你所加的载体的量和基因片段的量是否合理,一般这两者的比例为1:5-1:10之间比较好,还有就是你的连接体系各种成分是否还有较,连接条件和连接时间是否充分,如果这些都没有问题,那可能就是酶的问题,建议使用TAKARA的连接酶,品质好,连接稳定.