在所有色谱技术中,液相色谱法（liquid chromatography,LC）是最早（1903年）发明的,但其初期发展比较慢,在液相色谱普及之前,纸色谱法、气相色谱法和薄层色谱法是色谱分析法的主流.到了20世纪60年代后期,将已经发展得比较成熟的气相色谱的理论与技术应用到液相色谱上来,使液相色谱得到了迅速的发展.特别是填料制备技术、检测技术和高压输液泵性能的不断改进,使液相色谱分析实现了高效化和高速化.具有这些优良性能的液相色谱仪于1969年商品化.从此,这种分离效率高、分析速度快的液相色谱就被称为高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）,也称高压液相色谱法或高速液相色谱法.
气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物,而HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质,如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质.现在,HPLC的应用范围已经远远超过气相色谱,位居色谱法之首.
高效液相色谱的类型
广义地讲,固定相为平面状的纸色谱法和薄层色谱法也是以液体为流动相,也应归于液相色谱法.不过通常所说的液相色谱法仅指所用固定相为柱型的柱液相色谱法.
通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、分配色谱法、离子色谱法和凝胶色谱法四大类.其实,有些液相色谱方法并不能简单地归于这四类.按分离机理,有的相同或部分重叠.但这些方法或是在应用对象上有独特之处,或是在分离过程上有所不同,通常被赋予了比较固定的名称.
现在的液相色谱仪一般都做成一个个单元组件,然后根据分析要求将各所需单元组件组合起来.最基本的组件是高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据系统（记录仪、积分仪或色谱工作站）.此外,还可根据需要配置流动相在线脱气装置、梯度洗脱装置、自动进样系统、柱后反应系统和全自动控制系统等.
液相色谱仪的工作过程：输液泵将流动相以稳定的流速（或压力）输送至分析体系,在色谱柱之前通过进样器将样品导入,流动相将样品带入色谱柱,在色谱柱中各组分因在固定相中的分配系数或吸附力大小的不同而被分离,并依次随流动相流至检测器,检测到的信号送至数据系统记录、处理或保存.
二、梯度洗脱（gradient elution）又称为梯度淋洗或程序洗脱.在同一个分析周期中,按一定程度不断改变流动相的浓度配比,称为梯度洗脱.
梯度洗脱（gradient elution）又称为梯度淋洗或程序洗脱.
在气相色谱中,为了改善对宽沸程样品的分离和缩短分析周期,广泛采用程序升温的方法.而在液相色谱中则采用梯度洗脱的方法.在同一个分析周期中,按一定程度不断改变流动相的浓度配比,称为梯度洗脱.从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的.
梯度洗脱的优点：1.缩短分析周期；2.提高分离能力；3.峰型得到改善,很少拖尾；4.增加灵敏度.但有时引起基线漂移.
梯度洗脱的原理：
流动相由几种不同极性的溶剂组成,通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性,使每个流出的组分都有合适的容量因子k,并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离.
梯度洗脱特点：
提高柱效,改善检测器的灵敏度.当样品中的一个峰的k值和最后一个峰的k值相差几十倍至几百倍时,使用梯度洗脱效果特别好.梯度洗脱中为保证流速的稳定,必须使用恒流泵,否则难获重复结果.梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B.
如图（两个图一种原理,前者为洗脱装置和柱子之间封闭,适用于配备压力泵的色谱柱,后者为洗脱装置和柱子之间隔离开来,是梯度洗脱的简易装置.）：两个容器放于同一水平上,两容器连通,B与柱相连,当溶液由B流入柱时,A中的溶液就会自动来补充,经搅拌与第一容器的溶液相混合,这样流入柱中的缓冲液的洗脱能力即成梯度变化.
洗脱时应满足以下要求：①洗脱液体积应足够大,一般要几十倍于床体积,从而使分离的各峰不致于太拥挤.②梯度的上限要足够高,使紧密吸附的物质能被洗脱下来.③梯度不要上升太快,要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态.目的物的过早解吸,会引起区带扩散；而目的物的过晚解吸会使峰形过宽.
梯度洗脱可分为低压梯度(又称为外梯度)和高压梯度(又称为内梯度).
(1)低压梯度装置.低压梯度是采用比例调节阀,在常压下预先按一定的程序将溶剂混
合后,再用泵输入色谱柱系统,也称为泵前混合.
(2)高压梯度装置.由两台(或多台)高压输液泵、梯度程序控制器(或计算机及接口板控
制)、混合器等部件所组成.两台(或多台)泵分别将两种(或多种)极性不同的溶剂输入混合
器,经充分混合后进入色谱柱系统.