Question

为什么要构建基因文库?直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗?

Answer 1

基因文库技术分离目的基因 所谓文库(1ibrary)是指一种全体的集合.基因文库(gene library)则是指某一生物类型全部基因的集合.这种集合是以重组体形式出现.某生物DNA片段群体与载体分子重组,重组后转化宿主细胞,转化细胞在选择培养基上生长出的单个菌落(或噬菌斑)(或成活细胞)即为一个DNA片段的克隆.全部DNA片段克隆的集合体即为该生物的基因文库. 构建基因文库的意义不只是使生物的遗传信息以稳定的重组体形式贮存起来,更重要的是它是分离克隆目的基因的主要途径.对于复杂的染色体DNA分子来说,单个基因所占比例十分微小,要想从庞大的基因组中将其分离出来,一般需要先进行扩增,所以需要构建基因文库.在很多情况下目的基因的分离都离不开基因文库.此外基因文库也是复杂基因组作图的重要依据.基因文库构建包括以下基本程序： ① DNA提取及片段化,或是cDNA的合成. ② 载体的选择及制备. ③ DNA片段或cDNA与载体连接. ④ 重组体转化宿主细胞. ⑤ 转化细胞的筛选.当获得了含重组体的宿主细胞时,即完成了基因的克隆.基因的克隆只是分离基因的基础,基因克隆后还要对克隆的基因进行分离,即利用各种手段把目的基因从文库中分离出来.分离出目的基因还必须对其进行必要的检测与分析：如进行序列测定,体外转录及翻译、功能互补实验等.通过这些实验确定出基因的结构及功能.到这时才能算分离到了目的基因.所以,基因的克隆、克隆基因的分离、分离基因的鉴定是利用基因文库技术分离目的基因的主要内容