做PCR反应为什么在循环结束后要有5min延伸反应
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这个问题比较好理解,因为在循环结束后,体系中的taq酶可能很多正处于复制状态,如果此时降到室温,将会影响最终产率.所以再留出5分钟,以使正在复制中的taq酶能够复制完全,以合成更多的目的分子.
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看来可能我的表述不够清楚,那我稍微详细的说下
我们来看看最后一个循环
先95度,dna在高温下变性,解链成单链分子
然后退火,具体温度与所用引物有关,就以55度为例吧.
引物与单链dna模板结合上去
再72度延伸,在taq聚合酶的作用下,引物延伸.
该循环结束.
注意,此时尚有正处于合成过程中的dna链,为了保证充分的得率,所以再增加5分钟,以允许尚处于合成状态的dna分子能够完成整条链的合成.
在rna的逆转录时,也有这样的一个步骤.
用途也是一样的.
不知这下有没有讲清楚?