Question

pcr延伸过程中,如在下游遇到双链(另一条链已和模板退火),延伸还能进行吗?

Answer 1

第一个问题是不能,如楼上所言pcr体系里没有解旋酶；对于第二个问题,我认为进过预变性和变性后(95度高温),模板是不会静静的像教科书上画的那样离的很近,并且互补的,我认为它们会完全解链并均匀的分散到整个反应体系中,由于模板的量是很少的,一般ng水平,所以在体系内互补链相遇的可能性比较小,反倒是引物的数量远多于模板(30个循环可以扩增10亿倍),所以此时体系内模板应该呈现被引物层层包围,即使退火,模板也无法重新结合,因此在pcr反应中,这不会影响到引物的延伸.