解题思路：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术．PCR技术进行的条件有：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定性的DNA聚合酶，所运用的原理为DNA分子的复制，遵循碱基互补配对原则．PCR扩增DNA的过程包括：高温变性、低温复性、中温延伸过程．
A、作为模板的DNA序列只要加进一次，起模板作用，A错误；
B、模板链只要加入一次，引物片段必须不断加入，DNA聚合酶、DNA连接酶可以反复使用，B正确；
C、反应需要的DNA聚合酶可以反复使用，不需要不断的加进到反应当中，C错误；
D、PCR扩增反应过程中不需要DNA连接酶，D错误．
故选：B．
点评：
本题考点： PCR技术的基本操作和应用．
考点点评： 本题考查PCR技术的相关知识，对于此类试题，学生需对相关知识进行归纳总结，构建一定的知识网络，本题意在考查学生的识记能力和理解能力．