解题思路：分析题图：图示表示DNA分子片段，部位①为磷酸二酯键，是限制酶、DNA聚合酶和DNA连接酶的作用部位；②处是碱基对，碱基对的增添、缺失或替换会导致基因结构发生改变，引起基因突变；部位③为氢键，是解旋酶的作用部位．
A、限制酶具有特异性，只能切割特定脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，A错误；
B、解旋酶作用于③氢键处，B正确；
C、DNA连接酶作用于①，能连接形成磷酸二酯键，C错误；
D、获取目的基因时不需要解旋酶，D错误．
故选：B．
点评：
本题考点： DNA分子结构的主要特点．
考点点评： 本题结合DNA分子片段结构图，考查DNA分子结构特点、基因工程，要求考生识记熟记DNA分子结构特点，能准确判断图中各部位的名称；还要求考生掌握基因工程的工具，明确各种工具作用的部位，属于考纲识记层次的考查．