Question

荧光定量PCR引物设计本人在做荧光定量PCR之前,先用Primer 3.0设计了目的基因的引物,用于半定量PCR,而且也

Answer 1

在real-time PCR中，一般原则是100～150bp的扩增产物最好（Livak et al., Methods 2001），能使扩增效率尽量接近100%，以保证定量的准确性。引物的Tm值最好在58～62度之间，正反引物间Tm值差距在1度以内，GC含量在40%～60%之间且两条引物GC含量接近，引物长度在21～25bp。满足这些条件的引物适宜用来荧光定量PCR。在程序跑完之后要看一下熔解曲线...