要完成这个实验,首先需要克隆基因,然后连接到载体上,再转化进大肠杆菌中,摸索合适的条件使其基因产物表达,最好使其分泌到菌体后,这样才能方便检测。
首先在克隆基因时要设计合适的引物进行PCR,然后再将PCR产物纯化,PCR时也需要摸索条件。
然后是连接,要使用合适的载体,一般PCR产物可以直接使用T载体进行连接。
转化的时候要确定所制备的感受态细胞是可用的,最好用蓝白斑筛选。
最后可以用WESTERN去检验表达的产物,如果产物是蛋白质的话。
要完成这个实验,首先需要克隆基因,然后连接到载体上,再转化进大肠杆菌中,摸索合适的条件使其基因产物表达,最好使其分泌到菌体后,这样才能方便检测。
首先在克隆基因时要设计合适的引物进行PCR,然后再将PCR产物纯化,PCR时也需要摸索条件。
然后是连接,要使用合适的载体,一般PCR产物可以直接使用T载体进行连接。
转化的时候要确定所制备的感受态细胞是可用的,最好用蓝白斑筛选。
最后可以用WESTERN去检验表达的产物,如果产物是蛋白质的话。