大鼠血清总蛋白含量测定（双缩脲比色法）
一．原理
蛋白质是由许多氨基酸通过肽键相互结合而成.肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物.测定紫红色络合物的吸光度,能计算总蛋白的含量.
二．目的
1．掌握血清总蛋白含量的测定方法.
2．观察阴虚大鼠模型血清总蛋白含量的变化.
3．观察中药对阴虚大鼠模型血清总蛋白含量的变化.
三．试剂
1．总蛋白试剂
硫酸铜0.12 mmol/L
酒石酸钾钠21.1 mmol/L
氢氧化钠0.75 mmol/L
2．蛋白标准液：血清白蛋白50g/L
四．材料
1．试管（100*16mm）3支
2．移液器（P20ul、P200ul、P1000ul）各1把
3．石英比色皿（1ml）4只
五．测定方法
单位:ul
空白管（b）
标准管（std）
测定管（s）
H2O
蛋白标准液（50.0g/L）
样品
总蛋白试剂
10.5
－
－
1050
－
10.5
－
1050
－
－
10.5
1050
混匀,室温放置30分钟,以空白管校零,测定550nm处的吸光度.
六．计算
总蛋白含量（g/L）＝（测定管吸光度/标准管吸光度）×标准液浓度
七．注意事项
1．室温放置30分钟后必须立即测定吸光度,否则吸光度会增加.
2．实验试剂用量较少,所以加量一定要仔细、准确.