PCR引物设计的原则是两个引物的Tm不能相差5度以上,所以您的引物 可能需要重新设计.至于设计之后确定最适的退火温度,你可以采用梯度PCR,设置不同的退火温度进行PCR,看哪个温度PCR效果最好.
我在扩一基因的全长,设计的一对特异引物退火温度一个47度,一个64度,我该怎么确定退火温度?
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