你所说的切割后会出现三种连接情况是使用单酶酶切,这种情况下会使用碱性磷酸酶处理载体,将3‘-OH变为3’-P,3‘-P和5'-P不会形成磷酸二酯键,防止了自环化;另一个比较常用的方法就是使用双酶切,形成不同的末端,也可以防止自环化
关于含目的基因受体的筛选的问题将切割后的质粒和目的基因片段混合,会出现三种情况:质粒自连,目的基因自连,质粒和目的基因连
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